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培根固本 樹德鑄魂

正置培養霉菌污染原因分析驗證!

2019-06-27 16:29瀏覽數:21 

在2017年4月份,GB 4789.15-2016 霉菌和酵母菌計數正式開始實施。2016版與2010版之間的有明顯的不同,因為真菌是我們企標的常規檢測項目,且我們對產品控制把關非常嚴格,為了更好的響應新國標要求,所以在GB 4789.15-2016 還沒有正式實施前就組織微生物檢驗人員對2016版的方法做了大膽的嘗試學習實驗,實驗結果是同一疊的培養物同一方向出現了嚴重的污染(霉菌蔓延嚴重),由此QC主管馬上組織下面相關人員對可能情況做了分析及對GB 4789.15-2016的細致學習,當然也少不了相關的驗證拉。首先2016版與2010版最明顯的區別就是2016版的方法要求正置培養,而2010版的方法要求是倒置培養!

1.首先人員操作誤差。我們是上市公司,實驗室的人一個微生物檢驗人員都是經過嚴格考核的,微生物檢驗工作都有4到5年的操作檢驗,且出現污染后QC主管也一直在旁邊觀察了實驗人員的操作,并沒有發現有任何異常。因此可以排除人員操作誤差。


2. 設備和環境誤差。我們用于微生物檢驗的都是要求用可循環利用的經過嚴格濕熱霉菌后再烘干的玻璃移液管、玻璃培養皿,無菌操作是在嚴格消毒后的生物安全柜中進行,且我們微生物限定室的級別是10萬級,所用的培養箱是滅菌消毒過的另外2臺培養箱,相同條件下所得檢品,一半導致培養,一半正置培養,但是正置培養的還是出現了污染,倒置培養的沒有被污染,真菌長的均勻有規則。由此設備和環境的誤差也可以排除在外。

3. 物品誤差。由于我們一直都是用生理鹽水、培養基,且都是經過嚴格濕熱滅菌,高壓滅菌鍋也是經過當地藥監局校準過的,且滅菌時間的調整在培養基性質要求范圍內,即排除了檢測用品的誤差。

綜合以上可以得出培養方案是造成污染的主要原因,隨即與當地藥監局取得聯系,經溝通藥監局對真菌的培養也是開始實施2016版的方法正置培養,且沒有出現蔓延的情況,藥檢所是將平板一個一個擺開正置培養,而沒有疊起來培養。

我們將平板一個一個擺開正置培養迅速做了驗證:我們將受污染的培養箱做了消毒滅菌,同時開啟了另外2臺沒有被污染的培養箱將需要做霉菌培養的含樣品的凝固平板分別放到2臺培養箱做分開擺放正置培養及堆疊擺放正置培養,我們的實驗室的6臺培養箱都是經過校準的且都是同型號的生化培養箱,所以設備影響因素可以忽略,在培養擺放方式改變,其他基數不變的條件下培養,實驗結果是一個一個擺開正置培養的沒有受污染,而堆疊擺放正置培養的受到了污染。所以可以確定平板的擺放方式是造成污染的原因。

堆疊正置培養造成污染的原因分析:2016版方法要求培養皿正置培養在培養的第3天開始需要每天觀察和記錄培養結果,正置培養可以避免在觀察時反轉使霉菌的孢子抖動散落到培養基上而產生的次生菌落。我們都知道霉菌的特性就是有蔓延性,且由于培養箱加熱,培養箱內部還有風機使內部氣流在旋轉,2016版如果堆疊放置正置培養,且有一個樣品是有霉菌,那么菌絲就會通過縫隙拼命的往上爬,就像爬山虎一樣,開心的長著,且隨著生長孢子會脫落且特別輕,培養箱風機吹出的風把孢子吹散,停到蓋子上甚至通過蓋子之間的縫隙(蓋子沒有裝培養基比較輕)污染了其他的樣品,但是同一疊隨著菌絲的蔓延,通過培養皿直接蔓延到另外一個培養基上,一個蔓延一個,那么一疊被污染的情況會更嚴重,這也就驗證了我前面提到的同一疊同一個方向被污染的現象。并不是所有的企業實驗室都有好幾個培養箱的,所以就提醒一些微友們,2016版的方法千萬不要將霉菌堆疊培養,如果空間不夠可以在培養箱多裝幾個隔層,問題就解決了。

如果培養箱被污染了,可以用75%酒精和新潔爾滅兩種消毒劑對培養箱進行了全面的消毒,且大家最好是買那種有紫外消毒、臭氧消毒的培養箱,且消毒完最好不要馬上用,消毒完最好放個幾天在使用。


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